ПЦР на туберкулёз у детей и взрослых: что это такое, как проводят тест, особенности анализов и результаты диагностики

Описание ПЦР на туберкулёз

ПЦР (полимеразная цепная реакция) на туберкулёз – это точный анализ, способный выявить палочку Коха за несколько часов. Диагностика основана на методах генной инженерии. Врачи выделяют клетку ДНК, при помощи генно-молекулярных тестов определяют тип возбудителей.

Преимущества метода

Преимущества исследования:

• позволяет выявить возбудителя на ранних стадиях, без проявления видимых симптомов;
• диагностика не имеет противопоказаний и разрешена детям;
• исследование можно проводить при взятии минимального количества материала.
• универсальность исследования биоматериалов;
• исследование эффективно при определении рецидива болезни.

Недостатки метода

Наряду с достоинствами, у ПЦР исследования имеются и недостатки.

Основные из них:

1. Исследование не везде можно сдать. Поскольку оборудование для такой диагностики дорогостоящее, его устанавливают в платных лабораториях.
2. ПЦР на туберкулёз может дать положительный ответ, если обнаружит убитые микобактерии, к примеру, после проведённого лечения.
3. Мутации возбудителей болезни значительно снижают эффективность метода ПЦР, поскольку нити ДНК неспособны последовательно синтезироваться.
4. Необходимость тщательно выбирать биоматериал для анализа.

Показания для ПЦР диагностики

Направляют на обследование по следующим показаниям:

1. Если был хотя бы единичный контакт с больным туберкулёзом и выявить заболевание с помощью стандартных анализов сложно.
2. Бывают ситуации, когда нет возможности привести человека для рентгена или других исследований. В таких случаях гораздо проще доставить мокроту.
3. Анализ назначается накануне предстоящей операции, когда необходимо определить, болен человек или нет.
4. Если у пациента сомнительный результат реакции Манту.
5. Назначают беременным и детям, чтобы избежать облучения от рентгена.

Виды анализов ПЦР на туберкулёз

Выбор биоматериала для обследования на туберкулёз должен назначаться в индивидуальном порядке.

Для диагностики ПЦР на туберкулёз могут взять анализы:

• крови;
• слюны (мазок);
• мокроты;
• мочи.

Анализ крови

Особенности анализа крови на туберкулёз:

1. Проводят в тех случаях, когда другие диагностики не подходят или противопоказаны. Например, для постановки верного диагноза требуется делать не один рентген-снимок. Для организма излишнее облучение небезопасно, поэтому взять кровь у пациента гораздо проще.
2. Также врач может дать направление на кровь при получении спорных результатов после флюорографии.

Анализ слюны

Особенности:

1. Анализ слюны менее популярен и информативен, чем другие исследования, так как туберкулёз не поражает слюнные железы. Поэтому в большинстве случаев результат будет отрицательным.
2. Метод направлен на выявление лёгочных и внелёгочных форм.
3. Если под действием реагента цвет образца не меняется, это означает, что возбудителей нет. Если все же возникает подозрение на болезнь, то проводится дополнительный комплекс анализов.

Анализ мокроты

Анализ мокроты является наиболее информативным для выявления возбудителей туберкулёза. Пробы берут несколько раз, как правило, трёх раз достаточно. Это исключает возможность ошибок при получении некачественного материала.

Если человек заражён туберкулёзом, то вместе с кашлем будет выделяться мокрота в небольших количествах. У больных в запущенной стадии заболевания слизь будет выделяться с кровянистыми вкраплениями.

Не рекомендуется брать мокроту для обследования, если у пациента подозрения на туберкулёз костей или нервной системы.

Анализ мочи

Анализ мочи – это один из способов выявления внелёгочных форм заболевания: туберкулёз почек и мочеполовой системы.

При лёгочной форме заболевания общий анализ мочи практически неинформативен, так как не наблюдается ярко выраженных патологических изменений.

Из видео вы узнаете какой врач ставит диагноз туберкулёз. Снято каналом tuberculum. ru.

Подготовка к сдаче анализа

При сдаче анализа крови ПЦР стоит придерживаться некоторых правил для получения достоверного результата:

• рекомендуется сдавать анализ натощак;
• следует исключить алкоголь накануне обследования;
• нужно закончить приём антибиотиков за 15–20 дней до анализа;
• рекомендуется воздержаться от курения за час до забора крови.

При сдаче мокроты для обследования также рекомендуется следовать некоторым правилам:

• материал собирают утром, поэтому предварительно чистят зубы и тщательно полоскают ротовую полость;
• если мокрота плохо отходит, то рекомендуется вечером принять отхаркивающее средство или сделать ингаляцию;
• необходимо прекратить приём антибиотиков за 15 дней до обследования.

Для получения достоверного результата анализа мочи, пациенту рекомендуется придерживаться следующих правил:

• материал необходимо собирать с утра;
• накануне не рекомендуется употреблять в пищу продукты, которые способны изменить цвет жидкости (свёклу, чернику и другие);
• прекратить приём антибиотиков за 15 дней до обследования.

Как проводится ПЦР на туберкулёз

Особенности забора материала:

1. Анализ крови обязательно берётся у пациента утром из вены в лаборатории.
2. Для сдачи мокроты на слизь нужна обязательно из гортани и желательно без большого количества слюны. Её пациент должен сплюнуть в специальный стерильный контейнер, после чего сдать на исследование.
3. Врачи берут соскоб специальным инструментом со слизистой щеки.
4. Моча сдаётся в специальном контейнере. Берётся средняя часть утренней порции.

Молекулярно генетическая реакция посредством ПЦР проводится с помощью специального прибора, который называется амплификатор. Для изучения необходимы сегменты ДНК, с которых начинается синтез молекул.

Методика состоит из четырёх этапов:

1. Изначально собирается необходимый биоматериал для исследования (кровь, мокрота и слюна).
2. Затем образец прогревается при температуре до 98 градусов и не более двух минут. Таким образом, разрушается первичная форма генетики ДНК и образуются две цепочки.
3. Далее идёт отжиг или понижение температуры, за счёт чего праймер связывается с нитью ДНК.
4. Последний этап носит название элонгация. Это синтез молекул, который приводит к конечному результату.

Необходимо провести 25–30 подобных циклов, чтобы получить определённое количество копий ДНК вирусов. По ним и определяются возбудители заболевания.

Информативность и достоверность ПЦР диагностики составляет 100%.

Расшифровка результатов обследования

Сроки изготовления анализа составляют порядка 5–6 часов.

Диагностика методом ПЦР даёт 2 варианта результатов:

1. Обнаружено. В материале, который исследовали, были выявлены ДНК туберкулёзного агента. Вероятность заражения составляет 97%. Таких пациентов быстро направляют в противотуберкулёзный диспансер, где и будет проводиться лечение.
2. Не обнаружено. Отрицательный ответ свидетельствует об отсутствии возбудителя заболевания.

При положительном результате врачом проводится развёрнутая расшифровка, которая определяет стадию и очаг болезни.

Фотогалерея

Анализ мокроты на туберкулёз
Анализ крови на туберкулёз
Анализ слюны на туберкулёз

Особенности ПЦР на туберкулёз у детей

ПЦР назначают, если сомнителен результат пробы Манту или при малейшем подозрении на заражение. Провежение процедуры безапасно для детей.

Другие методики дигностики туберкулеза у детей

Квантифероновый тест

Сейчас распространены современные методы диагностики туберкулеза у детей. К таким можно отнести квантифероновый тест. Он способен выявить активный и скрытый туберкулез.

На основе этого лабораторного метода выявляется наличие в крови специфического интерферона, свидетельствующего о наличии болезни.

Проводят исследование в пробирке, что позволяет избежать погрешности, ведь на анализ не влияют внешние факторы. Если результат положительный, то это 100% показатель наличия инфекции.

Для этого метода не характерны противопоказания и побочные реакции. Болезнь и вакцинация ребенка не влияет на результат.

Т-клеточный маркер туберкулеза

Другим методом, который стал известен совсем недавно, является ТАМ-ТВ. Дословная его расшифровка Т-клеточный маркер туберкулеза.

Для определения заболевания производится целый ряд сложных лабораторных исследований. Благодаря ему происходят реакции между клетками в организме, и выявляется есть ли в них кластер. По этому определят присутствие болезни.

И хотя методика появилась недавно, ее уже активно используют. Это высокочувствительный метод. Его применяют даже тогда, когда исследование мокроты показало отрицательный результат.

У некоторых детей не удается взять для исследования мокроту, но эта методика позволяет проводить экспресс-диагностику и в таком случае.

Способ T-SPOT.TB

Название современного метода диагностики T-SPOT.TB (Спот) расшифровывается следующим образом: Т обозначает иммунные клетки, SPOT – переводится, как пятно, ТВ – общепринятое в медицине обозначение туберкулезной инфекции. С помощью анализа Спот удается подсчитать пятна, образующиеся на месте специфичных к антигену иммунных клеток. Тест способен выявить все формы заболевания и по праву может называться одним из самых достоверных методов диагностики.

Достоинства методики Спот:

• Высокая точность – до 97%.
• Безопасность. Для проведения анализа Спот не существует противопоказаний.
• Возможность обнаружения микобактерий у больных с хроническими патологиями, негативно влияющими на иммунную систему (ВИЧ, диабет).
• Отсутствие ложноположительного результата.

Обязательно учитывается, что тест Спот не способен отличить туберкулез Т в активной форме от латентной.

Преимущества диагностики туберкулёза с помощью ПЦР

Это исследование хоть и новое, но хорошо себя зарекомендовало, особенно в спорных случаях, когда диагноз поставить невозможно по ряду причин.

Благодаря ПЦР намного легче обнаружить в исследуемом материале ДНК возбудителя туберкулёза.

Преимущества ПЦР диагностики в следующем.

1. Это быстрый анализ. По небольшому фрагменту молекулы ДНК можно установить диагноз всего за несколько часов (около пяти), что успешно используется в экстренных ситуациях, когда, например, перед операцией нужно установить не болен ли человек туберкулёзом.
2. 
3. С помощью ПЦР проводится исследование любой биологической среды на присутствие в ней возбудителя. К примеру, можно провести исследование спинномозговой жидкости, если есть подозрение на туберкулёзный менингит.
4. Разрешена ПЦР диагностика инфекционных заболеваний в детском возрасте, так как метод безопасен.
5. Позволяет выявить возбудителя на любой стадии развития болезни.
6. Высокая чувствительность ПЦР позволяет обнаружить микобактерии туберкулёза, даже если в биологическом материале всего несколько микроорганизмов.
7. Хорошо его проводить для диагностики рецидива заболевания.

После всего прочитанного ПЦР кажется практически идеальным методом диагностики, который должны делать всем с подозрением на туберкулёз. Но и здесь есть свои минусы, их необходимо учитывать.

Проведение исследования

Медики не рекомендуют заменять Манту исследованием крови. Пациента направляют сдавать кровь, если проба Манту у него положительная. Но если из всех методов диагностики выбирать лучший, то можно остановиться на этом исследовании. Материал для тестирования должен быть чистым, поэтому проводить тест надо в специальной лаборатории. В таком учреждении могут спросить, какое обследование вам необходимо. Поэтому, чтобы сдать кровь на туберкулез, надо иметь при себе направление от лечащего врача.

Существуют методы тестирования крови, которые назначают вместо Манту:

• ИФА;
• ПЦР.

Метод ИФА (иммуноферментный анализ) является альтернативой Манту, потому что помогает выявить скорость распространения существующего заболевания и не применяется для профилактического исследования. Врачи считают его информативным и несложным в проведении. Его часто используют, чтобы уточнить результаты Манту.

Поскольку в отдаленных регионах нет качественного оборудования для проведения такого теста, то для определения заражения лучше там его не делать.

Обследование при помощи ПЦР (полимеразная цепная реакция) является наиболее точным. При проведении анализа ПЦР на туберкулез результат на 100% считается достоверным, если тест назначают для выявления болезни.

Методика проведения исследования заключается в следующем:

• небольшое количество материала помещают в вещество, которое предупреждает свертываемость крови;
• после этого отделяют плазму;
• под микроскопом определяют возбудителя;
• затем осадок перемешивают со специальным веществом и помещают смесь в помещение с необходимой температурой.

Происходит образование обновленного ДНК. Его наличие дает возможность установить диагноз и назначить лечение. Это обследование могут назначать пациентам любого возраста. Тестирование крови является эффективной заменой Манту при осуществлении своевременной диагностики. ПЦР выявляет наличие инфекции и характеристики бактерии. Этот метод используют для диагностирования туберкулеза различных органов.

В каких случаях нужна диагностика ПЦР

Сделать анализ ПЦР часто направляют больных, в случаях затруднительной постановки диагноза. Обычно это тест проводят комплексно вместе с другими исследованиями.

  Анализ мокроты на туберкулез: где, как и сколько делается?

Это делается в случаях подозрения первичного инфицирования, а другие способы не позволяют выявить заболевание.

Или же ПЦР-диагностику проводят в случаях, если больной самостоятельно не может прибыть в лабораторию, тогда материалы для проведения анализа доставляют его родственники.

Это может быть моча, мокрота, слюна или посев. Посевы на дому могут сделать только медицинские работники, имеющие сертификат на выполнение таких действий.

Именно ПЦР поможет выявить заболевания туберкулёзом у детей. Это исследование совершенно безвредно и имеет более высокую точность, в сравнении с пробой Манту.

Также проведение этого анализа показано и беременным женщинам, которым нельзя делать флюорографию.

Используют ПЦР-анализ и пред проведением операций, потому что такой способ более быстрый и точный.

Если возникли сомнения в результатах рентгена лёгких и пробы Манту, такую диагностику можно пройти самостоятельно.

При заболевании туберкулёзом проводится масса различных анализов, которые назначает врач, чтобы как можно точнее поставить диагноз. Часто приходится проходить целый комплекс анализов.

Иногда в расшифровке ИФА могут быть ложноположительные результаты, из-за содержания в крови антител после приёма курса лечения.

Также недостоверными могут оказаться и другие исследования. На данный момент ПЦР — самый точный из способов диагностики.

Определение туберкулезной палочки

При подозрении на инфицирование почек микобактерией специалист назначит комплекс исследований, включая общие анализы крови и мочи, пробу Манту ребенку, рентгенодиагностику, УЗИ, КТ, МРТ. Но безусловным подтверждением наличия инфекции будет положительный анализ мочи на микобактерии туберкулеза.

Для обнаружения возбудителя или его антигенного материала используют следующие способы:

1. Микроскопию по Цилю-Нильсену. После обесцвечивания материала серной кислотой наносят краску метиленовую синь. Микобактерии туберкулеза при окраске приобретают малиновый цвет и выделяются на фоне синих клеток. Это обусловлено устойчивостью палочек Коха к действию кислот. Чтобы повысить точность определения, рекомендуют забор мочи катетером.
2. Люминесцентная микроскопия — при окраске ауромином палочки Коха светятся оранжево-желтым цветом. Чувствительность выше, чем при окраске по Цилю-Нильсену.
3. Бактериологическое исследование — посев мочи на питательную среду (часто используют кровяную или картофельную). Оказавшись в благоприятных условиях палочки начинают размножаться. Но это длительный процесс и может занимать от 20 дней до 3 месяцев. Можно определить резистентность к противотуберкулезным средствам.
4. Биологическая проба — основана на выявлении микобактерий в тканях морской свинки после подкожного введения ей исследуемой мочи. Это исследование требует времени: свинку усыпляют и препарируют примерно через месяц, если она не умерла ранее. Либо для более ранней диагностики животному проводят туберкулиновую пробу.
5. Полимеразная цепная реакция — с помощью чувствительных систем выявляются в моче специфичные участки ДНК палочки Коха.

В некоторых случаях проводят провокационную пробу с подкожным введением туберкулина в дозе 20-100 ТЕ или облучением кожи инфракрасным лазером. В первом случае повторные анализы мочи проводят через 24 и 48 часов и сравнивают с первоначальным, во втором — через 10 дней. Положительным считают результат, характеризующийся увеличением количества эритроцитов и лейкоцитов в моче, выделением микобактерий.

Как производится забор крови методом ПЦР

Чтобы сдать кровь на анализ, больной должен не принимать пищу более шести часов. Лучше всего проходить процедуру утром натощак. Кровь забирается из локтевой вены через одноразовую иглу сразу в стерильную пробирку. Туда же вводится антикоагулянт, чтобы кровь не свернулась. Смешивать содержимое пробирки следует осторожно, не допуская резких движений.

Если кровь была взята вне лаборатории, ее надо немедленно доставить лаборанту. Для проведения анализа на туберкулез она должна храниться не более пяти часов. По истечении этого времени результат может быть неточным. Взятие материала вне лаборатории допускается только в том случае, если пациент не может приехать в больницу по состоянию здоровья. Например, он лежачий, и нет возможности нанять соответствующий транспорт.

Виды исследования мочи на бациллы Коха

Микобактерии туберкулеза при многократном увеличении выглядят как небольшие прямые или слегка изогнутые палочки, их длина доходит только до одной сотой миллиметра. В организме человека они присутствуют там, где происходит их развитие и размножение. Поэтому при туберкулезе почек бациллы будут активно выделяться вместе с мочой. Обнаружить их в анализе можно тремя способами:

• Бактериоскопическим;
• Бактериологическим;
• Биологическим.

Рекомендуем прочитать! Перейдите по ссылке:  Сдача мочи на бак посев диагностика туберкулеза

Врач может назначить один из перечисленных методов исследования или все сразу. В дополнение к ним обязательно нужно сдать общий анализ мочи. Так как на заболевание указывает не только присутствие бацилл Коха в пробе, но и косвенные признаки.

При проведении специфических анализов мочи на туберкулез нужно учитывать, что положительный результат всегда свидетельствует о поражении микобактериями тканей системы мочевыделения. Тогда как отрицательный результат не всегда может быть достоверным, что может быть связано с неправильным сбором урины и с другими факторами. Поэтому обычно назначается пересдача анализа и дополнительные методы диагностики.

Общий анализ

Проведение общего анализа мочи позволяет выявить косвенные признаки болезни, такие как:

• Появление гвоздевидных лейкоцитов;
• Стойкая кислая реакция урины (практически в половине случаев заражения микобактериями);
• Появление в моче белка (протеинурия);
• Эритроцитоурия – присутствие крови в моче;
• Пиурия – гной в урине.

Если результат анализа соответствует вышеперечисленным признакам, пациента обязательно нужно отправить на дополнительное обследование, стандартное при подозрении на туберкулез.

Особенности бактериоскопического исследования мочи

Бактериоскопический анализ мочи иначе называется исследованием по Цилю-Нельсону. В его основе лежит устойчивость микобактерий туберкулеза по отношению к кислой среде урины. Взятый образец обрабатывается в лабораторных условиях определенными реактивами:

1. Сернокислыми растворами или солянокислым спиртом. Они обесцвечивают неустойчивые к кислой среде бактерии. Тогда как кислотоустойчивые микобактерии туберкулеза оказываются окрашенными, что можно увидеть в микроскоп.
2. Раствором метиленового синего хлорида. Под его воздействием палочки Коха приобретают насыщенный красно-малиновый оттенок.

Бактериоскопический посев мочи на туберкулез является наиболее быстрым. Используют его не только для обнаружения палочек Коха, но и для выявления других, устойчивых к кислым средам бактерий. Туберкулезные микобактерии при проведении анализа имеют характерный цвет и форму изогнутых или ровных палочек.

На достоверность анализа по методу окраски Циля-нельсона влияет правильный забор мочи. Поэтому все рекомендации врача по отбору пробы нужно неукоснительно соблюдать.

Бактериологическое выявление туберкулезных бактерий в моче

Бактериологическое исследование мочи является наиболее точным методом диагностики туберкулеза почек, но делается такой анализ на протяжении от 2-х до 6 недель. Вначале необходимо на протяжении трех дней подряд сдать анализ мочи, осадок урины помещается в чашку Петри с особой питательной средой, это может кровяная среда или картофельные образцы.

Рекомендуем прочитать! Перейдите по ссылке:  Исследование биоматериала на туберкулез

В питательной среде происходит рост болезнетворных микроорганизмов, после чего выявленный возбудитель идентифицируется. В кровяной среде микобактерии туберкулеза начинают расти примерно через семь дней, в картофельной для этого может потребоваться месяц и больше.

По результатам бактериологического анализа принимается решение о проведении дополнительных методов диагностики и назначается специфическое лечение.

Биологическая проба

Стопроцентно достоверный результат показывает анализ мочи при подозрении на туберкулез почек в виде биологической пробы. Ее проведение заключается во введении осадка мочи в брюшную полость или под кожу подопытному животному со склонностью к заражению болезнью. В лабораторных условиях чаще всего с этой целью используют морских свинок, крыс.

В течение месяца за условно инфицированным животным наблюдают. Если в моче пациента имелись палочки Коха то, как правило, за это время грызун погибает и подвергается исследованию с обязательным определением в организме очагов инфекции. Выявить результат биологической пробы можно и раньше, для этого у животного берут кровь на туберкулин или проводят пункцию лимфоузлов с определением наличия воспалительного процесса.

Биологическая проба назначается пациентам редко, так как не во всех лабораториях возможно ее проведение.

Проба Нечипоренко

Проведение исследования мочи по Нечипоренко по сравнению с общим анализом является более достоверным. Данное исследование дает полную картину о содержании эритроцитов и лейкоцитов в образце урины, определяет количество белковых клеток. Отклонение от нормы не всегда свидетельствует об инфицировании туберкулезом, но точно указывает на инфекционно-воспалительный процесс в мочевыделительной системе. Чтобы определить причину выявленных изменений и установить заболевание пациенту назначаются другие лабораторные методы исследования и инструментальная диагностика.

Тест CLINISPOT-TB

Это наиболее современный анализ на туберкулез. Его также называют T-SPOT. Суть теста:

• при наличии в организме микобактерий на них реагирует иммунная система;
• эта реакция заключается в выделении некоторыми Т-лимфоцитами гамма-интерферона;
• суть теста – в определении числа таких активированных лимфоцитов.

Спот-анализ позволяет выявить бактерии даже в очень небольшом количестве. Его используют для выявления латентных, скрытых форм болезни, а также для диагностики патологии у людей с угнетенным иммунитетом (например, на фоне СПИДа). Тест высокоспецифичен, ложноположительные результаты практически не наблюдаются. Это означает, что положительный результат практически в 100% говорит о наличии туберкулеза.

Чувствительность же, то есть способность выявить инфекцию, у СПОТ-анализа достигает 96%, даже при внелегочных формах болезни. Для сравнения, чувствительность реакции Манту составляет менее 70%. Т-СПОТ выпускается в Великобритании.

QuantiFERON-TB Gold in-Tube test – еще один современный метод выявления туберкулеза по крови. Как и Т-СПОТ, его используют при высоком риске заражения (например, проживание в семье больного) в сочетании с отрицательной пробой Манту. Производится такая тест-система в Австралии.

Существуют тесты для одновременного быстрого выявления туберкулеза и устойчивости его возбудителя к рифампицину и рифампицину + изониазиду. Ими пользуются в крупных противотуберкулезных центрах. Это INNO-LiPA Rif, TB kit и GenoType MTBDRplus. Однако они не могут использоваться для подтверждения диагноза болезни.

Кожные пробы на туберкулез у детей

Как понятно из названия, эти пробы осуществляются путем введения специального вещества и контроля последующей реакции на коже обследуемого человека.

Проба Манту (туберкулиновая проба)

Эта проба известна всем с детства. Её массово ставят в школах и детских садах. Все помнят красную «пуговку», которую нельзя мочить и расчесывать до тех пор, пока медсестра с линейкой не определит её размер.

В кожу между запястьем и локтевым сгибом с внутренней стороны вводится туберкулин. В месте введения возникает специфическая реакция организма, которая и свидетельствует о наличии или отсутствии в организме туберкулезной инфекции.

Осторожно! Проба Манту подходит не каждому ребенку. У этого метода распознования туберкулеза есть целый ряд противопоказаний.

Существуют следующие противопоказания к постановке пробы Манту:

• наличие кожных заболеваний у ребёнка;
• эпилепсия;
• хронические заболевания в стадии обострения;
• карантин в детском коллективе (должно пройти не менее месяца с окончания карантина);
• с последнего заболевания должно пройти не меньше месяца;
• проба Манту никогда не ставится в один день с какой-либо прививкой;
• педиатр может рекомендовать не ставить пробу Манту детям, часто болеющим респираторными заболеваниями в течение года.

Оценка результатов исследования проводится через 3 дня после постановки пробы. Прозрачной линейкой измеряется размер папулы. Нормальным считается размер 5-16 мм. Если размер больше или меньше, врач назначает дополнительное исследование.

Данный тест на реакцию туберкулеза детям не является прививкой и не содержит туберкулиновую палочку — лишь продукты её жизнедеятельности. Однако некоторые родители отмечают, что ребёнок заболевает после постановки пробы.

В настоящее время активно ведутся споры о том, насколько достоверна проба Манту. Ведь повлиять на результат могут очень многие факторы:

• неправильный уход за местом укола;
• наличие какого-либо заболевания;
• индивидуальная реакция организма на балластные примеси, содержащиеся в пробе;
• наличие глистов в организме также может исказить результат.

Из-за не слишком высокой надежности этой диагностической методики некоторые врачи предлагают родителям провести анализ крови на туберкулез вместо Манту ребенку.

Диаскинтест или просто д тест

Данный вид исследования является более точным и все чаще воспринимается, как предпочтительный анализ на туберкулез вместо Манту у ребенка. Иногда он назначается как дополнительное исследование уже после постановки пробы Манту.

В кожу на предплечье или между запястьем и локтевым сгибом вводится особое вещество, которое присутствует только в возбудителях туберкулеза.

Осторожно! Противопоказания к проведению Диаскинтеста такие же, как и к постановке пробы Манту.

Оценка результатов проводится на третий день. В норме кожная реакция отсутствует. Наличие папулы говорит о положительном результате. Это значит, что в организме обследуемого присутствует туберкулезная палочка: либо человек только заражён ею, либо болезнь уже развилась.

Фото 2. Небольшой флакончик с “Диаскинтестом”. Он необходим, когда проводится д тест на туберкулез. Норма у ребенка при таком тесте – отсутствие кожной реакции.

Важно! В отличие от пробы Манту Диаскинтест не даёт ложноположительной реакции при наличии в организме микобактерий, которые не являются возбудителями туберкулеза.

Некоторые дошкольные учреждения помимо результатов Диаскинтеста просят также предъявить справку от фтизиатра.

Как диагностируют: основные способы

Для раннего выявления туберкулеза у детей и подростков используются несколько методов. Разные способы позволяют всесторонне изучить степень заражения организма и подобрать адекватное лечение.

Расшифровкой результатов исследования занимается лечащий врач.

К какому врачу обращаться

Первоначальный прием проводит педиатр. Врач визуально осмотрит ребенка, спросит, на что он жалуется, послушает, есть ли хрипы при дыхании.

Проверит, есть ли увеличение лимфатических узлов.

У родителей или родителя узнает, были ли в семье родственники, ранее переболевшие туберкулезом, выяснит, с кем контактировал ребенок за последние несколько недель.

Данная информация нужна для понимания возможных причин появления возбудителя.

Затем педиатр дает направление на сдачу крови, мочи на общий анализ, на проведение флюорографии, рентгена.

Дальше ребенок направляется на прием к более узкому специалисту – фтизиатру.

Врач-фтизиатр может назначить проведение дополнительных исследований для уточнения диагноза. Он определяет список лекарственных препаратов, дает рекомендации по дозировке и продолжительности лечения.

Кровь, моча, мокрота

Общий анализ крови может быть в пределах нормы, но при этом есть значения, по снижению или повышению которых можно судить о развитии туберкулезе у детей:

• Уровень лейкоцитов. В норме у детей от 1 года до 6 лет составляет 5-12 Г/л, старше 7 лет – 4-9 Г/л.
• Количество лимфоцитов. До 6 лет – 45-65%, 7 лет и старше – 25-40%.
• Скорость оседания эритроцитов. Допустимым значением считается интервал от 1 до 10 мм/ч.
• Иммуноферментный анализ крови показывает количество антител, выделяющихся на борьбу с микобактериями.

Еще одним методом исследования является анализ мокроты.

Для сбора мокроты необходимо соблюдать некоторые моменты:

• почистить зубы, прополоскать водой;
• сбор производится утром, натощак.

Лаборанту нужно следить, чтобы в емкость для сдачи материала попадала только мокрота. Она более густая и мутная, в отличие от слюны.

Анализ мочи позволяет выявить наличие палочки Коха в организме.

Туберкулиновая проба

Суть метода заключается во введении под кожу 0,1-0,2 мл мертвых клеток микобактерий, вводимый препарат носит название «Туберкулин».

Позволяет выявить, если ли в организме палочка Коха.

После инъекции под кожей появляется небольшое уплотнение. Нельзя допускать попадания воды на место укола, запрещено накладывать бинт или пластырь, наносить антисептические средства.

Через 72 часа врач оценивает состояние пробы, измеряет линейкой размеры уплотнения. Если уплотнение (папула) не покраснело, не увеличилось в размерах, то такая реакция называется отрицательной.

Возможно незначительное покраснение и увеличение папулы в пределах 5-16 мм. Если размер более 17 мм, необходимо обращаться к педиатру для проведения дополнительных исследований.

Вот так выглядит реакция после пробы Манту на туберкулез у детей, в том числе и норма:

Реакцию Манту нельзя делать детям, имеющим следующие проблемы:

• заболевания кожи;
• аллергия;
• недавно перенесенная простуда, грипп;
• температура тела выше 37 градусов.

ПЦР

Полимеразная цепная реакция – эффективный способ определения возбудителя туберкулеза в крови. На анализ сдается кровь, мокрота или слизь.

Затем материал помещают в физиологический раствор, выделяют цепочку ДНК. Выделенный участок помещается в термостат, находится ДНК возбудителя инфекции.

Данный метод позволяет выявить ДНК микобактерии, определить место нахождения туберкулезной палочки в организме и назначить правильное лечение. Недостаток — высокая цена.

Диаскинтест

Что такое Диаскинтест и как делается данная проба на туберкулез у детей?

Исследование проводят, если реакция Манту не дает однозначного результата.

Вводится туберкулезный рекомбинантный аллерген.

Результат после введения инъекции оценивают аналогично при пробе Манту.

Препарат Диаскинтест необходим, если у ребенка есть аллергия на туберкулин или родители против реакции Манту.

Скрин–тест

Включает нескольких анализов, исследований:

• реакция Манту или Диаскинтест;
• анализы крови, мокроты;
• флюорография, рентген.

Возможна сдача других анализов. Точный список необходимых исследований дает врач. Позволяет всесторонне выявить степень заражения организма микобактериями.

Обследования

Рентгенографические способы эффективны при выявлении различных форм туберкулеза:

• Рентген органов грудной клетки покажет негативные изменения, происходящие в этих органах.
• Рентгеноскопия определяет количество жидкости в легких.
• Компьютерная томография, МРТ. Выявляет любые изменения в органах, костях.

Возможность применения этих методов определяет врач.

Для квантиферонового теста производят забор крови из вены. Проводят химические преобразования, в крови ищут гамма-интерфероны. Если они обнаружены, значит, в организме есть инфекция.

Бронхоскопия является сложным методом исследования, но эффективным. Предварительно проводят подготовку, сдают необходимые анализы.

Проходит под наркозом. Ребенку вводят бронхоскоп, на конце имеется видеокамера, позволяющая после обработки видеозаписи увидеть, есть ли жидкость в бронхах, плевре легких.

Этот метод не является основным, возможность применения определяет врач. После процедуры ребенку нужно будет принимать лекарства, чтобы предотвратить возможные негативные явления.

Т-клеточный маркер туберкулеза основан на целом комплексе сложных лабораторных исследованиях мокроты. Анализ достаточно эффективен, появился недавно, в 2014 году.

Об основных методах диагностики туберкулеза у детей расскажет сепциалист в этом видео-ролике:

Биохимический

При выполнении этого исследования делают забор крови из вены, результат получают на следующий день. При правильной расшифровке показателей можно на ранней стадии выявить серьезные заболевания. К сожалению, биохимический анализ крови при туберкулезе не дает точной диагностики. Исследование преследует такие цели:

• периодический контроль лечебного процесса;
• коррекция нарушений гомеостаза (обеспечения стабильности внутренней среды организма);
• выявление действия лекарств, побочных эффектов.

При туберкулезе биохимические показатели крови зависят от стадии заболевания, осложнений, сопутствующих патологий. При расшифровке анализов отмечают:

• при неактивном виде инфекции общий белок, белковые фракции сыворотки крови находятся в норме;
• при остром течении заболевания, в случае, когда начинает прогрессировать хроническая форма туберкулезной инфекции, альбумин-глобулиновый коэффициент уменьшается (норма 15,-2,3).

Биохимическое исследование при развитии бактериальной инфекции помогает в динамике отслеживать состояние печени и почек. Для оценки самочувствия пациента, особенно при тяжелой форме заболевания, обращают внимание на такие показатели крови при туберкулезе:

• прямой и общий билирубин (ниже нормы);
• АСТ – аспартатаминотрансфераза (возрастает);
• АЛТ – аланинаминотрансфераза (увеличивается).

Инновационные методы диагностики

Раннее определение инфекции позволяет провести своевременную химиопрофилактику, предотвратить тяжелое течение заболевания.

Стертость клиники в детском возрасте, недостаточные результаты анализов, неграмотная интерпретация при оценке проб не позволяет своевременно верифицировать инфекцию. Для предотвращения детской заболеваемости требуется тщательный анализ результатов с возможностью установки диагноза на раннем этапе.

Современный способ лабораторной диагностики туберкулеза у детей – выявление TAB-TM

Реакция на определение Т-клеточного маркера у детей под названием «TAB-TM» характеризуется высокой чувствительностью. Суть метода заключается в выявлении особого кластера дифференцировки (CD-27), локализованного на поверхности Т-лимфоцитов. После выделения этого фактора проводится окрашивание цитокинов с цитометрией.

Метод в литературе стал описываться с 2014 года. Результаты наблюдений свидетельствуют о высокой чувствительности метода. Определение TAB-TM является экспресс методом диагностики туберкулеза путем исследования мокроты.

Обязательно ли делать ПЦР при туберкулезе?

Непосредственно всем пациентам с подозрением на ТВЦ проведение цепной диагностики не делается, так как процедура требует использования дорогого оборудования. Не все лечебные государственные учреждения позволяют его приобрести, тем более, что привычные методики диагностирования на микобактерии туберкулеза тоже информативны.

Сюда относят:

• Тщательное собирание анамнеза, опрашивание больного;
• Внешний осмотр;
• Туберкулиновая проба Манту;
• Рентгенографическое либо флюорографическое обследование;
• По надобности компьютерное диагностирование;
• Микроскопическое или бактериологическое исследование маска с мокротой.

ПЦР на туберкулез делается исключительно тогда, когда не имеется возможности сделать другой инструментальный анализ либо в сложных для диагностики обстоятельствах.

Несмотря на то, что изобрели великое множество методов диагностирования, количество больных туберкулезом продолжает расти. Кроме того заболеваемость приобрела некоторые особенности: нередко наблюдается тяжелая форма недуга, увеличивается число летальных исходов, возбудитель приобретает устойчивость имеющимся химиопрепаратам.

Многие люди не желают каждый год проходить профилактический осмотр, отказываются от вакцинации, что ведет к увеличению заболеваемости. Такие обстоятельства требуют эффективных и информативных способов исследования, доступных для взрослых и детей с диагнозом tbc. ПЦР имеет преимущества перед другими диагностическими методиками.

Признаки болезни у детей и подростков

Симптомы туберкулеза на ранних стадиях можно принять за обычную простуду или грипп.

Ребенок жалуется на повышение температуры тела, повышается до 37-38 градусов, чаще в вечерние часы. Снижается масса тела. В некоторых случаях происходит потеря до 50% веса.

Другие признаки:

• слабость;
• головная боль;
• ухудшение памяти;
• повышенное потоотделение;
• сухая, бледная кожа;
• боли в суставах;
• увеличение частоты сокращений сердца;
• кашель, продолжающийся 3-4 недели;
• одышка;
• появление кровяных пятен в слюне;
• неприятные ощущения в области груди.

Но иногда туберкулез протекает без проявления симптомов.

Общие анализы крови и мочи, биохимия крови

Общий анализ крови туберкулез не покажет. Однако при этом заболевании могут выявляться некоторые отклонения, которые могут навести на мысль о заболевании:

• незначительное снижение количества эритроцитов и гемоглобина может быть признаком кишечного или легочного кровотечения, а также фиброзно-кавернозной формы болезни;
• увеличение количества палочкоядерных нейтрофилов (сдвиг формулы влево, доходит до 20% палочкоядерных форм), плюс отсутствие эозинофилов и снижение числа лимфоцитов и моноцитов;
• повышение СОЭ до 40 – 80 мм/ч.

Анализ мочи обычно не меняется. В биохимическом анализе крови при легочном туберкулезе можно выявить:

• снижение уровня общего белка и альбумина;
• снижение уровня натрия в сыворотке крови;
• повышение уровня АЛТ, АСТ;
• незначительное повышение в крови уровня кальция.

К кому нужно обращаться, чтобы провести этот анализ?

Назначить такое исследование способны сразу несколько специалистов:

• терапевт;
• пульмонолог;
• педиатр;
• фтизиатр.

Направить на ПЦР-диагностику сможет любой из перечисленных специалистов, а расшифрует результаты и сделает окончательные выводы — врач-фтизиатр.

Кроме этого фтизиатр изберёт нужный курс лечения и где именно его потребуется пройти: в условиях специализированного стационара или же на дому.

Вместе с этим даст пациенту нужные рекомендации по борьбе с этим заболеванием.

Ступени диагностирования

Молекулярная реакция способом ПЦР – это несложная манипуляция, занимающая мало времени. Берется необходимый биоматериал: для определения tbc используется кровь, мокрота, промывная жидкость бронхов.

1. Сначала разрушается первичная форма ДНК, разъединяются 2 цепочки при высокой температуре (максимум 98ОС не больше 2 минут);
2. Затем производится отжиг, первичная температура понижается на несколько делений, возникает связь нити ДНК с праймером;
3. Следующая стадия называется элонгация, при этом происходит биосинтез необходимых молекулярных структур.

Для получения нужного количества копий ДНК должно пройти от 25 до 30 таких циклов, при этом получившееся количество микобактерий легко распознаётся.

ИФА

С помощью этого метода исследования быстро определяют наличие в крови специфических антител к возбудителю туберкулеза – палочке Коха. ИФА – иммуноферментный анализ – применяют как альтернативу пробе Манту. Результаты готовы через два часа. При проведении исследования в лаборатории:

• у пациента производят забор крови из вены;
• биоматериал обрабатывают специальным раствором;
• ожидают формирования связи между антигеном и антителом;
• при положительном результате фиксируют реакцию фермента.

Недостаток анализа ИФА – в отсутствии точности на 100%, невозможности определения стадии заболевания. Не исключено получение ложноположительных и ложноотрицательных результатов. Обнаруженные антитела к туберкулезу не всегда свидетельствуют о болезни. Отрицательный результат – не обязательно отсутствие инфекции. Иммуноглобулин Amg не обнаруживается при исследовании в случае:

• начальной стадии инфекции, когда он еще не выработался в достаточном количестве;
• наличия у больного иммунодефицитного состояния.

Положительный результат – наличие при туберкулезе в анализах иммуноглобулина Amg. Это может говорить о таких процессах в организме:

• обнаружена активная форма заболевания, которая не носит масштабный характер;
• иммуноглобулины появились как следствие недавней вакцинации ребенка от туберкулеза, или перенесенной болезни (ложноположительный результат);
• отмечаются существенные сдвиги при лечении;
• пациент болеет туберкулезом.

Причины отрицательного результата пцр при диагностике туберкулеза

Распространение микобактерий по организму лимфогенным (по лимфатическим сосудам) и гематогенным (по кровеносному руслу) путем обеспечивает заселение многих тканей, появление внелегочных очагов инфекции.

При рентгенологическом определении очагов распада (деструкции) в легких нет необходимости проведения пцр. У взрослых с использованием рентгенографии можно выявить запущенные формы с высокой степенью достоверности.

У детей пцр исследование применяется чаще вследствие скрытой локализации микобактерий внутри лимфоузлов, что приводит к получению отрицательных результатов при применении других способов диагностики. При бактериальном посеве достаточно выявления около 10 микроорганизмов. Нужно учитывать, что не все отвечают за активный туберкулез легких.

Для правильной диагностики пцр, бактериального посева, дст следует соблюдать требования:

1. Хранить материал в стерильных пробирках;
2. Исключать попадание других бактерий;
3. При транспортировке соблюдать личную гигиену для предотвращения попадания биоматериала на тело, лицо, в дыхательные пути.

Советуем прочитать:Обезболивающие таблетки, мази и гели при болях в суставах

Храниться кровь вместе с консервантом ЭДТА. Существуют уникальные особенности приготовления материала для каждого лабораторного анализа, с которыми знакомы специалисты.